Pambuka Rincian

Untuk mendapatkan efek terbaik dari produksi antibodi, perlu untuk merancang polipeptida antigen dengan hati-hati, dan desain harus memenuhi kondisi dasar: dalam proses imunisasi,antigen tidak akan menghasilkan respon kekebalan yang berlebihan, dan pada saat yang sama dapat menghasilkan antibodi yang mengikat protein yang menarik.

Secara umum dianjurkan bahwa panjang urutan polipeptida antigenik antara 8-20 residu asam amino.ada risiko bahwa spesifisitas polipeptida tidak akan kuat dan kemampuan pengikatan antara antibodi yang dihasilkan dan protein asli tidak akan cukup kuatNamun, jika panjang urutan melebihi 20, maka akan mungkin untuk memperkenalkan struktur sekunder, dan antibodi yang dihasilkan dapat kehilangan spesifisitasnya, dan semakin panjang rantai peptida,semakin sulit untuk disintesisDengan pengalaman bertahun-tahun yang kaya dalam sintesis peptida sulit,KS-V Peptide dapat secara efisien dan cepat menyediakan antigen peptide selesai kemurnian tinggi untuk membantu penelitian dan pengembangan Anda.

Aplikasi

Meskipun sebagian besar fragmen peptida linear pendek dari protein tidak terstruktur dalam larutan air,Sejumlah peptida imunogenik dan antigenik telah terbukti memiliki preferensi konformasional untuk bentuk terstrukturDengan menggunakan terutama NMR dan CD spektroskopi, telah dimungkinkan untuk mendeteksi dan mengukur populasi yang cukup kecil dari beta-turn, heliks, dan konformasi heliks yang baru lahir.Studi terbaru telah diterbitkan yang menunjukkan bahwa adanya bentuk terstruktur berkorelasi dengan lokasi epitop sel T dan/atau sel B dalam urutan peptidaStruktur kristal sinar-X kompleks antara peptida dan antibodi antipeptida sering menunjukkan peptida terikat dalam konformasi beta-turn,dan kehadiran helix dalam satu kompleks antibodi peptida telah ditunjukkan oleh spektroskopi NMR. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionHasil ini berpotensi dapat digunakan dalam desain vaksin berbasis peptida.

Keuntungan menggunakan antigen peptida

Pertama-tama, antigen peptida menawarkan solusi cerdas untuk generasi antibodi dalam kasus-kasus di mana urutan asam amino protein target diketahui, tetapi protein itu sendiri tidak tersedia,atau terlalu kompleks secara struktural untuk diperoleh sebagai protein yang stabil dan utuh secara struktural (.g. reseptor transmembran tertentu, saluran ion, dll).pendekatan imunogen peptida menawarkan fleksibilitas dalam memilih dan merancang antigen untuk domain protein target sebagai keuntungan tambahanAntigen peptida juga sangat berguna untuk menghasilkan antibodi terhadap situs pengikat post-translationally modified pada protein target.

Keuntungan lainnya adalah::

• epitope didefinisikan dengan baik dari awal
• urutan protein adalah semua yang dibutuhkan
• kemungkinan reaksi silang jauh lebih rendah
• antigen sepenuhnya sintetis, yang hemat biaya dengan waktu pasokan biasanya sangat singkat

Strategi Desain untuk Antigen Peptida

Meskipun banyak urutan peptida dapat menjadi imunogenik, tidak semuanya sama efektifnya dalam menghasilkan antibodi dengan reaktivitas terhadap protein target.Generasi antibodi yang sukses dengan antigen peptida tergantung pada beberapa faktor yang perlu dipertimbangkan dalam desain, termasuk:

Keakuratan urutan asam amino protein target
struktur 2ary / 3ary yang diprediksi dari protein utuh
pemilihan domain/daerah protein yang akan ditiru oleh antigen peptida
kebutuhan konjugasi antigen peptida ke protein pembawa yang lebih besar
kemudahan sintesis urutan peptida tertentu
Oleh karena itu, rekomendasi umum berikut berlaku untuk desain antigen peptida:

Pastikan spesies dan urutan protein yang benar telah diidentifikasi.
Pilih antigen peptida dari daerah yang dapat diakses oleh pelarut dari protein asli.ini adalah daerah yang terpapar di permukaan protein yang bersentuhan dengan lingkungan air (hidrofilik) dari pelarutDaerah tertentu dari protein mungkin tidak dapat diakses oleh antibodi, seperti wilayah transmembran atau pusat protein globular.

Keuntungan penting adalah bahwa antigen peptida dapat dirancang untuk mencakup epitope tertentu yang menarik.Domain tertentu mungkin juga hadir dalam protein lain: urutan ini harus dihindari untuk meminimalkan kemungkinan reaksi silang yang tidak diinginkan dan dengan demikian mengoptimalkan spesifisitas antibodi secara keseluruhan.Urutan dengan homologi urutan minimal paling baik dipilih untuk mengurangi pengikatan protein yang tidak diinginkan dari target.

Tergantung pada struktur 3D domain target dalam protein utuh, teknik pembatasan mungkin diperlukan untuk meniru struktur tersier antigen secara optimal.Sebagai salah satu spesialis dalam mimik permukaan protein, KS-V memiliki berbagai teknologi (sebagian proprietary) untuk desain dan sintesis konformasi yang dibatasi antigen peptida

gen sering terlalu kecil untuk menghasilkan respon kekebalan yang signifikan tanpa konjugasi sebelumnya dengan protein pembawa seperti KLH, BSA atau OVA.Oleh karena itu, biasanya penggunaan konjugat protein pembawa peptida.

Sintesis Antigen Peptida

Untuk desain antigen peptida, kemudahan sintesis urutan peptida tertentu juga harus dipertimbangkan.dan sangat menguntungkan bagi peptida untuk menggabungkan asam amino yang mempromosikan imunogenikitas (seperti asam amino dasar dan aromatik)Kandungan asam amino hidrofobik sebaiknya dijaga di bawah 50%, dan rantai panjang residu hidrofobik sebaiknya juga dihindari.setidaknya satu residu bermuatan (arginine), glutamin, asam aspartik, atau lisin) harus dimasukkan dalam setiap lima asam amino.Kelarutan peptida juga dapat ditingkatkan melalui penggantian konservatif atau penambahan residu kutub ke ujung N atau CDalam merancang antigen sebaiknya hindari daerah yang kompleks, seperti lembaran beta atau alfa-heliks, tetapi sebaliknya bertujuan untuk daerah yang fleksibel.

KS-V menerapkan kemampuan dan keahliannya yang paling canggih untuk sintesis antigen peptida, termasuk (jika diperlukan) kendala konformasional, PTM, konjugasi atau biotinylation.Untuk sebagian besar proyek pembuatan antibodi, kemurnian setidaknya 85% dianjurkan untuk setiap antigen peptidaNamun jika diinginkan kita dapat menyediakan antigen dengan kemurnian yang lebih tinggi juga. kita umumnya akan mensintesis sekitar 10 mg peptida, yang biasanya cukup untuk protein-konjugasi,Pemindaian ELISA dan membangun pengaturan kromatografi matriks afinitas jika diinginkan.