Deskripsi:

Menggunakan pemetaan peptida, perubahan halus pada struktur utama protein atau antibodi dapat diidentifikasi yang dapat mempengaruhi aktivitas protein atau afinitas pengikatan.Pemetaan peptida dengan LC-MS/MS adalah salah satu tes kualitatif paling kuat untuk mengkonfirmasi urutan primer protein atau antibodiLayanan ini dapat digunakan untuk membandingkan berbagai lot protein, antibodi atau biosimilar yang sama.

Layanan analisis pemetaan peptida dengan LC-MS/MS termasuk:

• Antibodi/protein yang diperhatikan dinaturasi, direduksi, dan dicerna dengan enzim proteolitik seperti LysC atau trypsin.
• Opsional: enzim proteolitik kedua digunakan untuk meningkatkan cakupan urutan protein.
• Campuran peptida yang dihasilkan dipisahkan pada HPLC fase terbalik.
• Setelah pemisahan HPLC, analisis lebih lanjut dilakukan dengan spektrometri massa resolusi tinggi (Thermo Fisher Orbitrap Velos atau Fusion).
• Sebuah peta peptida protein dihasilkan untuk perbandingan dengan protein referensi.
• Puncak dianalisis ke urutan primer.
• Opsional (dua atau lebih sampel): evaluasi kesetaraan dilakukan untuk menilai variasi dari satu lot ke lot lain antara protein atau untuk membandingkan biosimilair.

Informasi yang harus disampaikan:

• Konfirmasi urutan primer (penyelenggaraan urutan: 60-90% menggunakan satu enzim; > 98% menggunakan dua enzim atau lebih).
• Glikoprofiling oligosakarida yang terikat N (heterogenitas glikoform & perkiraan pekerjaan situs).
• Identifikasi dan pengukuran kuantitatif PTM seperti deamidasi, oksidasi,Pembentukan piroglutamat N-term dan pemrosesan Lys C-term (posisi asam amino yang dimodifikasi dan % modifikasi dapat terdeteksi).
• Penilaian kesamaan antara berbagai lot.
• Penilaian perbandingan untuk biosimilair.

Pengolahan sampel: Denaturasi, reduksi/alkilasi dan pencernaan enzimatik diikuti oleh LC-MS atau LC-MS/MS.